菌種名稱：白色念珠菌 菌種編號：(CMCC(F)98001)    

一、目的：確保菌株的質(zhì)量，對實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行合理的保存，方便管理和使用。

二、標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇及增菌

用75%酒精浸泡過的脫脂棉擦凈安瓿管，將凍干管尖端放在酒精燈火焰上加熱，用消毒后的剪刀取下外部瓶蓋，并將凍干管開口處在酒精燈火焰上加熱滅菌，并保持在火焰旁操作。用無菌吸管吸取0.1mL~0.2mL復(fù)蘇液，滴入管內(nèi)，待安瓿管內(nèi)的牛奶菌粉溶解，再用無菌吸管，吸取全部菌懸液接在1~2支裝有5mL沙氏液體培養(yǎng)基試管后，在28.0℃下培養(yǎng)18h～24h。（經(jīng)過冷凍干燥保存后，復(fù)蘇時(shí)間較長，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間。觀察液體培養(yǎng)基有渾濁現(xiàn)象再進(jìn)行下一步。

三、鑒別培養(yǎng)

用滅菌后的接種環(huán)取適量的上述沙氏液體培養(yǎng)基菌懸液劃線接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿，在28.0℃下培養(yǎng) 72h，觀察菌落形態(tài)。應(yīng)為圓形或卵圓形，灰白色。

菌株保藏

1、瓷珠凍存管保藏法

操作步驟：在無菌條件下，用75%酒精浸泡過的脫脂棉擦凈凍存管表面并讓其自然風(fēng)干，打開凍存管的螺旋瓶蓋，用滅菌的接種環(huán)挑取適量經(jīng)鑒別培養(yǎng)后的新鮮純菌培養(yǎng)物，放入凍存液中；擰緊瓶蓋，來回顛倒使菌體乳化為混濁的菌懸濁液，此時(shí)菌懸濁液會(huì)吸附在小瓷珠內(nèi)外表面；用無菌移液管將凍存管中多余的菌懸濁液盡量吸出（吸出的菌懸濁液應(yīng)放入75%酒精消毒液中并隨后進(jìn)行高壓滅菌處理）；擰緊瓶蓋制備成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株凍存管并貼上相應(yīng)的詳細(xì)標(biāo)簽，并做好相關(guān)菌種記錄，將凍存管置于-20℃冰箱中密封上鎖保存。（-20℃可保存一年）。

凍存管的使用：取出凍存管并用力搖晃，使瓷珠均勻分散在管內(nèi)；無菌條件下擰開凍存管，用無菌鑷子取出一顆小瓷珠（小瓷珠從凍存管取出后不得放回），擰緊瓶蓋；盡可能快的將凍存管放回原來的保存環(huán)境（溫度過多的改變會(huì)降低菌體的生存能力），將小瓷珠直接接種于適合的沙氏液體培養(yǎng)基。

2、斜面低溫保藏法

無菌條件下，將標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸濁液，以無菌操作接種在10mL沙氏固體斜面培養(yǎng)基上，置于相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌充分生長后，將砂芯硅膠塞部分用牛皮紙包扎好后，移至2~8℃的冰箱中保存，定期轉(zhuǎn)種，轉(zhuǎn)種頻率為一月一次。

此保存方法方便平時(shí)實(shí)驗(yàn)對標(biāo)準(zhǔn)菌種的取用。

五、菌種的使用

購進(jìn)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，凍干粉末于2℃~8℃保藏，開啟復(fù)活分離后菌株以及其他須保管的菌株應(yīng)填寫菌株使用記錄表，記錄菌種名稱、編號、來源、復(fù)活分離時(shí)間、傳代數(shù)、保管條件、保管時(shí)間等。

廢棄的菌種、盛放的容器及其它使用的廢棄物需經(jīng)高溫消毒滅菌處理（121℃ 30min）后方可丟棄，實(shí)驗(yàn)完后的工作臺(tái)及實(shí)驗(yàn)室設(shè)備設(shè)施及時(shí)進(jìn)行酒精消毒處理或紫外燈滅菌處理，填寫相關(guān)儀器設(shè)備使用消毒記錄，以便追溯，嚴(yán)防污染。

（檢驗(yàn)分析中心）