紫外-可見分光光度法對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響因素

分光光度法是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用的技術(shù)包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法。

紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測(cè)定的方法。朗伯一比爾（Lambert-Beer）定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理，其意義為：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比，而與透光度T成比。

紫外-可見分光光度計(jì)由5個(gè)部件組成：①光源。具有穩(wěn)定的、足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續(xù)光譜，如鎢燈、鹵鎢燈（波長(zhǎng)范圍350～2500納米），氘燈或氫燈（180～460納米），或可調(diào)諧染料激光光源等。②單色器。它由入射、出射狹縫、透鏡系統(tǒng)和色散元件（棱鏡或光柵）組成，是用以產(chǎn)生高純度單色光束的裝置，其功能包括將光源產(chǎn)生的復(fù)合光分解為單色光和分出所需的單色光束。③試樣容器，又稱吸收池。供盛放試液進(jìn)行吸光度測(cè)量之用，分為石英池和玻璃池兩種，前者適用于紫外到可見區(qū)，后者只適用于可見區(qū)。容器的光程一般為0.5～10厘米。④檢測(cè)器，又稱光電轉(zhuǎn)換器。常用的有光電管或光電倍增管，后者較前者更靈敏，特別適用于檢測(cè)較弱的輻射。近年來還使用光導(dǎo)攝像管或光電二極管矩陣作檢測(cè)器，具有快速掃描的特點(diǎn)。⑤顯示裝置。這部分裝置發(fā)展較快。較高級(jí)的光度計(jì)，常備有微處理機(jī)、熒光屏顯示和記錄儀等，可將圖譜、數(shù)據(jù)和操作條件都顯示出來。

應(yīng)用范圍包括：①定量分析，廣泛用于各種物料中微量、超微量和常量的無機(jī)或有機(jī)物質(zhì)的測(cè)定。②定性和結(jié)構(gòu)分析，紫外吸收光譜還可用于推斷空間阻礙效應(yīng)、氫鍵的強(qiáng)度、互變異構(gòu)、幾何異構(gòu)現(xiàn)象等。③反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究，即研究反應(yīng)物濃度隨時(shí)間而變化的函數(shù)關(guān)系，測(cè)定反應(yīng)速度和反應(yīng)級(jí)數(shù)，探討反應(yīng)機(jī)理。④研究溶液平衡，如測(cè)定絡(luò)合物的組成，穩(wěn)定常數(shù)、酸堿離解常數(shù)等。

紫外-可見分光光度法常用的定量方法是校準(zhǔn)曲線法，即先配制一系列濃度由小到大的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)定出它們的吸光度（或透光率），以吸光度（或透光率）為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。在測(cè)定待測(cè)物時(shí)，操作條件應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)相同，以待測(cè)液的吸光度（或透光率）從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出該樣品的相應(yīng)濃度。

影響紫外-可見分光光度法檢測(cè)結(jié)果的主要因素有：

檢測(cè)人員操作過程是否規(guī)范且準(zhǔn)確（試劑稱量、溶液配制、試液移取等），選用的紫外-可見分光光度法計(jì)是否工作正常，選用的測(cè)量條件是否適合（如波長(zhǎng)、狹縫寬度等）；比色皿（池）是否潔凈，參比溶液的選擇是否正確，樣品測(cè)試吸光度范圍是否在儀器測(cè)定范圍和校準(zhǔn)曲線吸光度范圍內(nèi)。

所用試劑、耗材、用水等是否符合要求，如純度、保存條件是否滿足要求，是否含有待測(cè)物或者存在干擾等；標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度是否準(zhǔn)確（標(biāo)準(zhǔn)溶液配制或者稀釋過程是否準(zhǔn)確，所選用的標(biāo)準(zhǔn)溶液保存條件是否滿足要求且在有效期內(nèi)等）；所用量器（天平、容量瓶、移液管等）是否存在系統(tǒng)誤差等。

選用檢測(cè)方法是否合理，即選用的標(biāo)準(zhǔn)方法是否符合要測(cè)定的對(duì)象，如待測(cè)物性質(zhì)、待測(cè)物濃度范圍及取樣量、干擾及消除情況、存在狀態(tài)等等；顯色過程操作是否正確（試劑加入順序、加入量等），顯色時(shí)間、顯色溫度等條件是否符合檢測(cè)方法的要求，是否在顯色的穩(wěn)定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)。

樣品保存條件是否滿足方法要求，樣品保存期限是否在方法規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，是否存在交叉污染等；檢測(cè)過程是否采取有效的質(zhì)量控制措施（如平行測(cè)定、加標(biāo)、質(zhì)控樣品等）。

除此之外，數(shù)據(jù)處理也會(huì)帶來誤差。最好采用標(biāo)準(zhǔn)系列法，平行多次測(cè)定，計(jì)算每次測(cè)定結(jié)果并求出平均值，按誤差理論對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，最后給出結(jié)果。數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)移、計(jì)算等過程是否有誤也直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此，建立完善的數(shù)據(jù)審核制度對(duì)檢測(cè)很有必要。

綜上所述，檢驗(yàn)人員的操作，儀器、試劑、適用性方法的選擇、環(huán)境條件等影響，都會(huì)對(duì)紫外可見分光光度法的檢測(cè)結(jié)果有影響。應(yīng)合理利用這些因素減小對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，進(jìn)而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。