高壓蒸汽滅菌器適用于棉布（簽）、金屬、陶瓷、搪瓷、玻璃、耐熱用品、普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等的滅菌，是目前醫(yī)學(xué)及微生物檢測(cè)中使用廣泛，安全有效的滅菌方法。利用密閉的耐高壓蒸氣滅菌器(autoclave)，在蒸氣不外溢的條件下，使鍋內(nèi)壓力增高，隨之蒸氣溫度也增高。通常在103.4kPa壓力下蒸氣溫度達(dá)到121.3℃，維持15-20分鐘，可殺滅所有的繁殖體和芽胞。高壓蒸汽滅菌方法具有滅菌效果可靠、熱穿透力強(qiáng)、溫度較高、處理后可隨即進(jìn)行干燥的優(yōu)點(diǎn)。

    高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果關(guān)系到最終試驗(yàn)結(jié)果的成敗，因此，實(shí)驗(yàn)室要定期對(duì)高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)，目前監(jiān)測(cè)的方法主要有以下三種：

1.化學(xué)指示卡

    化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時(shí)，由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺，并與對(duì)照色相比，可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色，影響滅菌效果的觀測(cè)。

    化學(xué)指示卡只能監(jiān)測(cè)滅菌鍋的滅菌溫度，并不能準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)滅菌時(shí)間，通過(guò)顏色變化來(lái)達(dá)到監(jiān)測(cè)效果。優(yōu)點(diǎn)是使用方便快捷，缺點(diǎn)是不能準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)滅菌時(shí)間。如果高壓鍋使用的頻率較高，建議每次都在需要滅菌的的材料外側(cè)使用過(guò)程化學(xué)指示卡（包外卡）作為標(biāo)識(shí)。

    化學(xué)指示卡分類(lèi)：從滅菌器的使用層面上分為3類(lèi)：高溫、低溫、環(huán)氧乙烷(EO)；低溫滅菌器包括：過(guò)氧化氫等離子體(plasma)滅菌器、低溫蒸汽甲醛滅菌器(LTSF))、環(huán)氧乙烷(EO)滅菌器。從滅菌化學(xué)指示卡本質(zhì)層面上可分為以下6類(lèi)：

    第1類(lèi)：過(guò)程化學(xué)指示卡（包外卡）用于單個(gè)物品或包裝，指示物品是否經(jīng)過(guò)了滅菌過(guò)程，以區(qū)分滅菌或?yàn)闇缇锲?，包括指示膠帶、塑封袋邊緣試紙、生物指示劑標(biāo)簽等。

    第2類(lèi)：特殊檢測(cè)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）：用于滅菌器或滅菌標(biāo)準(zhǔn)的特效實(shí)驗(yàn)操作，如各種B-D試紙。檢測(cè)預(yù)真空滅菌器冷空氣排出效果和飽和蒸汽的穿透效果以及漏氣情況。

    壓力蒸汽滅菌器每日使用前必須進(jìn)行1次BD試驗(yàn)。方法：將BD試驗(yàn)專(zhuān)用的化學(xué)指示圖平放于實(shí)驗(yàn)包的中心，用雙層包布包裹以后，將測(cè)試包水平放置于柜室底層靠近柜門(mén)與排氣口處進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。除測(cè)試包外，柜內(nèi)不放置任何物品；在134 ℃，4 min后，取出BD測(cè)試紙觀察顏色變化，如BD測(cè)試紙變色一致均勻，說(shuō)明冷空氣排除完全，可以使用；如BD測(cè)試紙變色不均勻，說(shuō)明滅菌器有冷空氣殘留，不能使用，需要檢修。

    第3類(lèi)：?jiǎn)我粎?shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）:用于滅菌過(guò)程中單一參數(shù)的測(cè)試，如氣體濃度卡（EO、甲醛等）。

    第4類(lèi)：多參數(shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）具有兩個(gè)或兩個(gè)以上關(guān)鍵參數(shù)（時(shí)間、溫度、濕度、氣體濃度、蒸汽飽和程度）。

    第5類(lèi)：綜合參數(shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）是一種專(zhuān)用于對(duì)各滅菌過(guò)程中規(guī)定范圍內(nèi)的所有參數(shù)起作用的指示卡，其設(shè)定值需達(dá)到滅活值。它檢測(cè)的滅菌過(guò)程關(guān)鍵參數(shù)應(yīng)等于或超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)ISO 1138對(duì)生物指示物的性能要求。性能等同或高于生物指示物。

    第6類(lèi)：模擬化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）用于對(duì)各滅菌周期的所有評(píng)價(jià)參數(shù)起作用的指示卡，其設(shè)定值以所選的滅菌程序設(shè)置值為依據(jù)。周期確認(rèn)型指示劑:是滅菌循環(huán)驗(yàn)證指示物。它的參數(shù)最精確。不同的指示劑必須要用于每一不同的周期中，印有顏色變化染料的紙片。

    第4、5、6類(lèi)放在每一滅菌包內(nèi)，用于檢測(cè)小范圍問(wèn)題，不能提示整批次微生物已被殺滅，批次檢測(cè)需要用化學(xué)批量PCD（有植入型物品是需同時(shí)放入生物監(jiān)測(cè)指示劑）

2.留點(diǎn)溫度計(jì)

    留點(diǎn)溫度計(jì)包括雙金屬留點(diǎn)溫度計(jì)、水銀留點(diǎn)溫度計(jì)。實(shí)驗(yàn)室用的工業(yè)留點(diǎn)溫度計(jì)，設(shè)計(jì)的溫度要比體溫計(jì)高得多，一般是在負(fù)10度至300度之間。

    水銀留點(diǎn)溫度計(jì)是指水銀柱指示的位置不隨著溫度的下降而下降，仍留在并指示著曾經(jīng)達(dá)到過(guò)的最高點(diǎn)。像我們所用的體溫計(jì)就是這樣一種溫度計(jì)，留點(diǎn)溫度計(jì)需經(jīng)檢定合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前，需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下，把水銀溫度計(jì)放在盛水的大三角瓶里，滅菌時(shí)把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計(jì)的溫度和要求溫度是否一致。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)在1℃之間，則說(shuō)明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。

    如果高壓鍋使用的頻率較高，建議每個(gè)月用留點(diǎn)溫度計(jì)對(duì)高壓鍋滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

3.生物指示劑

    生物指示劑是一類(lèi)特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗(yàn)證，生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。

    將生物指示劑（嗜熱脂肪芽孢桿菌菌片）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)菌片）用無(wú)菌鑷子放人密封試管中,置于試驗(yàn)包中心部位,化學(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56±2℃溫度培養(yǎng)24-48小時(shí)，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說(shuō)明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說(shuō)明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。  

1）按結(jié)構(gòu)分可分為片狀生物指示劑和自含式生物指示劑。一般來(lái)說(shuō)都是用的自含式的多，就是里面有菌片，外面是密封的安瓿。

    2）按培養(yǎng)時(shí)間可分為通用型生物指示劑和快速型生物指示劑。通用型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后指示菌種新陳代謝引起培養(yǎng)液pH改變，通過(guò)酸堿指示劑變色來(lái)進(jìn)行判讀，時(shí)間一般在24或48小時(shí)以上；而快速型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后的酶促反應(yīng)，通過(guò)熒光進(jìn)行判讀，時(shí)間一般為3-4小時(shí)，同時(shí)國(guó)外正在研發(fā)更加快速的生物指示劑，有望在1小時(shí)之內(nèi)得出結(jié)果。

    生物指示劑也是GB15981-1995《消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)》中推薦使用的壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測(cè)方法。優(yōu)點(diǎn)是能夠準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)滅菌溫度和時(shí)間是否滿(mǎn)足滅菌要求，缺點(diǎn)是檢測(cè)鑒別所需時(shí)間較長(zhǎng)。

示例：

嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑
型號(hào)：H3723
用途∶適用于醫(yī)院消毒、檢驗(yàn)檢測(cè)、衛(wèi)生材料生產(chǎn)企業(yè)等機(jī)構(gòu)
指標(biāo)菌∶Geobacillus stearothermophilus嗜熱脂肪芽孢桿菌
芽孢數(shù)∶1×105以上
包裝∶25支／盒
壓力蒸汽滅菌生物指示劑又名嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑，是由嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片(ATCC7953)、培養(yǎng)基及塑料外殼組成自含式生物指示劑。菌片含菌量為1×105～5×105cfu/片。D值為1.3～1.9分鐘。在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件下，存活時(shí)間≥3.9分鐘，殺滅時(shí)間≤19分鐘。 

使用方法

1.在ACE test(滅菌生物指示劑）表面的標(biāo)簽空白處，用油性筆記錄滅菌管理的必要事項(xiàng)。（如：滅菌處理日期、位置等）。根據(jù)標(biāo)簽的化學(xué)指示劑變化，可區(qū)分有否經(jīng)滅菌處理。 
2.將ACE test數(shù)支橫放在滅菌器內(nèi)不易被滅菌完全的位置。
3.滅菌處理后，將ACE test取出，確認(rèn)標(biāo)簽上的化學(xué)指示劑由藍(lán)色變成黑色后，放置15分鐘以上冷卻至室溫。
4.將完全冷卻后的ACE test垂直放入夾子中，直到塑料管底部完全安定，手指按夾子上部將內(nèi)部玻璃管夾破。此階段吸附芽孢的紙片接觸培養(yǎng)液，培養(yǎng)準(zhǔn)備完畢，請(qǐng)確認(rèn)紙片是否浸在培養(yǎng)液中并及時(shí)培養(yǎng)。
5.在56±2℃溫度間將ACE test豎著進(jìn)行培養(yǎng)。為了便于對(duì)照，用同一批號(hào)未使用的ACE test，在玻璃管夾破后，同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)24小時(shí)、48小時(shí)或7天培養(yǎng)，可確認(rèn)滅菌效果。
6.確認(rèn)滅菌效果后，將標(biāo)簽取下粘貼在記錄薄留存。

(檢驗(yàn)分析中心）